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标题: 全国冰冻切片比赛获奖名单和点评（重编：带问题切片照片） [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2009-11-10 16:25 标题: 全国冰冻切片比赛获奖名单和点评（重编：带问题切片照片）

一等奖：广西医科大学一附院  王华
二等奖：上海复旦大学附属肿瘤医院  周学科
            浙江大学医学院附属第一医院  杨如菊
            浙江省杭州市第四医院    赵海菲
三等奖：贵州省肿瘤医院  杨勇
            北京市中日友好医院  杨磊
            四川省雅安市人民医院祁宏枝
            北京大学医学部病理系马晓龙
            福建省邵武市市立医院陈海燕
            福建省肿瘤医院       朱伟峰

   这次比赛我看到了明显的变化，非常高兴：一是广西出了一匹黑马，这相当难能可贵。二是质量明显提高。三是北京、福建进步非常快。这说明我国的技术水平在快速提高。
下面我重点点评一下这次比赛中存在的问题，希望能给以后的工作和比赛提供经验：
一、超时原因：
1、苏木素、依红的染色时间是这次比赛超时的最根本原因。由于大会提供的苏木素需要染2.5-3分钟，依红染1分钟，而一般选手在家时往往苏木素只需要1分钟，依红1秒钟，这就需要选手根据这个变化，加快平时比赛所用各种步骤的速度，因为苏木素依红的时间是不能省的，如果你还是按原来的速度来操作，时间肯定来不及。
2、过于追求完美：很多选手对切片的要求过高，一张一张反复切，希望能切出一张完美的片子，这个观点是错误的。一般来说，前面一二张往往是最好的，因为越切到后面，越感到后面的片子没有前面好，心情会越来越紧张，最后最多也只能切到和前面差不多的片子，大多数是比前面的差。
3、有的选手错误的动作太多：切片干燥了后才固定；用电吹风加热切片，还一张一张吹；用电吹风吹干片子等等。这些动作不仅延长了操作时间，还且对质量有着致命的影响：细胞退变，切片后立即固定，细胞形态好，这是所有步骤的关键，而且可以节省时间。电吹风加热切片，如果是一张切片，可能会快，三张切片一张张吹，就未必会快，而且会造成三张切片染色深浅不均匀，因为你加热的时间、电吹风的热量不会稳定。电吹风吹干片子更不可取，酒精脱水，也就几秒钟就完成了，不会不干净，你用酒精脱了还用电吹风吹，增加啊不少时间，主要是增加了细胞收缩。
二、切片质量
1、冰晶多：这是最普遍的现象，主要原因是冷冻速度慢：（1）有的选手将标本托盘放在外面，这是错误的，热的托盘会延长冷冻的时间，增加冰晶的产生。（2）胶放得太多，同样也会延长冷冻的时间。（3）没有用冷锤压（厂家没有提供）。
2、细胞退变：切片粘在玻片上要立即固定，固定时间越快，细胞退变越少，从固定速度上看，甲醇是最快也是最好的。还有选手用加热方法固定，更错，细胞核结构几乎看不清。
3、细胞收缩：
用电吹风吹或用丙酮固定，都会引起细胞收缩，但如果没有对照，不是很明显。
4、染色较浅：
主要是苏木素的染色时间和在家不一样，这就要求选手的基本功了，很多选手不习惯，由于前面切片花费时间太多，染色来不及或经验不足，对深浅肉眼观察不准确。其实这时应该用显微镜观察一下，这只要花费十几秒钟。
5、切片有很多空洞：
主要是肝脏，由于动物冷冻后发脆，粗切时肝组织呈大块大块的粉状，肝切片上有很多的小白点（即肝组织掉出），这就要求我们多细切几下。
6、皱折：
主要是选择展片的方法不一样造成：有的人用毛笔慢慢拉下在切片台上，然后用玻片粘；有的选手用毛笔在组织块成小卷后拉开，然后用玻片粘；这二种情况在组织好切，心情平各时，也能做出好片子。但在比赛时，肾上腺素较高，手多多少少会颤抖，容易造成拉力不均匀，导致切片出现小皱。还有选手组织边上留胶太少，会造成组织边缘出现皱折。
7、组织发脆：
由于本次比赛选用了三种组织：肝、肾、肠。为了使所有组织都能好切，并且不影响后面选手比赛。所以规定冰冻切片机的室温不能改变，-18度。快速致冷后的肝组织会明显发脆，如何解决？有的选手不懂，就这样切下来了，切片上就会有很多的裂痕。有的选取手用手去摸，较果好一点，但有可能全部去除，会有少数地方出现裂痕。解决的方法：把样本头温度调至-14度即可。现在很多冰冻切片机（双压缩机）都有这功能（切片机里的OT就是样本头的温度）。徕卡的1950更明显，把那头的功能单独做出来，当然买的时候千万注意要配制，因为1950的很多功能都是选购的，如果你买标配，会有一些很实用的功能没有。也可以将冻好的组织放室温略复温一下。
8、包埋面：主要是肠要竖起来包，只有在样本托是冷的情况下，才容易将肠竖起来，而且肠间质水份不多，不需要冷锤压。
三、心态：
很多选手过于在意比赛的成绩，导致心情太紧张。比赛比的就是心里素质，如果你太在意，就会发挥失常。有的选手手在发抖，还有的紧张得满头大汗，这都不会取得好成绩。只要你和日常工作时一样做，就会有好成绩。我科派的选手才工作二年，做冰冻也就三个多月，一方面是想让她出去学习学习，另一方面她没什么压力，一个新手不抱什么希望，只要完成任务就行，所以她只用了14分钟就全部完全了，而且拿了二等奖。一颗平常心，也是比赛成功的诀窍。
四、过于自信：
也有少数选手过于相信自己的水平，忘记了强中自有强中手，你的切片质量在你本地可能是最好的，但不等于在全国是最好的，所以应该多向别人学习，多看看别人的片子，找出自己的差距，没有最好，只有更好。学习是无止境的，只有向别人学习，才会进步。过于自信会固步自封，停止前进。
四、冰冻切片的注意事项：
1、细胞核的结构：这是病理诊断的关键，要想有一个正确的诊断，必须要有很好的细胞核结构，要求没有退变，没有收缩，核内没有空泡，染色质清晰可见。这也就包含了颜色要染得好，过深或过浅的染色都会影响诊断的判断。根据这：干燥后固定，加热等方法都会影响细胞核结构，所以都不可取。然后就是要组织不发脆，细胞没裂痕（这就要求使用样本头的功能，把组织加热至-14度，用手摸不可能全部解决）。最后就是片子要厚薄适中，太厚了也会影响效果（比赛一般5-7微米），太薄了会影响染色效果，切的慢的选手可选择5微米，但如果是切得很快的选手可选择7微米，比赛用的是新机器，特别容易切的太薄。如果你做好这一块，应该说百分之六、七十的分数就有了。
2、冰晶：冰晶会使诊断产生误诊，特别是软组织肿瘤和含水量较高的组织。这是我们很多技术员不重视的，也有很多人认为，冰冻切片机室温一样，没办法改变，大家都一样。其实不然，这里也有很多决窍：托盘要冷，不要把托盘拿出来放组织，更不能把托盘放在外面；胶要少，不放最好（但缺点是组织容易粘不牢，切片时边上会有小皱），必须用冷锤压，这样冻的更快，在机器没有冷锤情况下如何解决？可以用托盘的背面压，这个方法我试过几次，存在一定风险，就是怕粘住了下不来，要等冻透了才行，拿下来时有可能是不该下来的那面先下来了。所以我科选手也没敢用。第一名广西的选手有可能用了，我看到过她片子的外观：特别大，呈园形，可能是压过了。这就要求我们技术员要搞清楚冰晶的形成机制和随机应变的能力。
3、注意有没有切全，有没有空洞，有没有污染。
4、小皱、刀痕、气泡等等，这些都是小分，只有在以上相同情况下，才会有差距。
  很多选手认为只要切得平整，没皱，没气泡，没刀痕，染色好，就有高分，其实是错误的，这只是做了表面文章。所以说：一个不懂诊断的技术员成不了好技术员，因为你不知道诊断需要什么，重点是什么，你就不知道如何去提高质量。因此做一个好的技术员必须学会诊断。
5、固定液的选择并不十分重要：95%酒精、甲醇、AAF液、环保固定液都是醇性固定液，性质相差不大，区别并不十分明显。
6、掉片：冰冻片直接固定，一般不会掉片，只有4%甲醛容易掉。也可能是片子切的太厚了，切薄了就不容易掉。在日常工作中，蛋白质成份较少的组织：角质层的或软骨，如指甲、气管容易掉。解决方法：在甲醇内加冰醋酸也不容易掉；有一些没有蛋白质的我试过用液基细胞（TCT）的阳离子玻片（国外免疫组化也用），效果非常好。

7、

染色太浅可以按顺序退回去重染，包括苏木素和伊红。染色后脱水低浓度酒精过得太快导致脱水不彻底，片子上还有水珠；透明度不好；透明液出来后擦片子时间太长，片子干了，出现空气结晶；片子封反了等等这样的低位错误千万不能犯。
这是我在这次比赛中的个人感觉，希望对大家有帮助，比赛的主要目的不是为了比谁强，而是应该发现问题，找到解决问题的方法，改正以前不正确的方法，共同提高全国的切片水平。如果比完了，奖一发、酒一喝，回家原来怎么做还是怎么做，那这样的比赛就没有任何意义了。

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作者: dingwei 时间: 2009-12-10 16:58

问题片子：

作者: 临风揽月 时间: 2009-12-13 19:32

谢谢丁老师的总结，做技术的的确要学会总结。病理技术学会很容易，但是要是想学的精，还真的要多下功夫！

作者: ranzhiyuan 时间: 2009-12-13 21:07

谢谢指导！

作者: ranzhiyuan 时间: 2009-12-13 21:09

顺便问一下丁老师，这是全国性的比赛，为什么没有我们部队医院呢？

作者: dingwei 时间: 2009-12-13 21:30

好象有部队医院参加

作者: 郭建红 时间: 2009-12-19 10:46

谢谢丁老师。

作者: dwlabc2004 时间: 2010-3-22 21:06

学习中

作者: Moonk 时间: 2010-3-28 09:14

学习

作者: 小玲儿 时间: 2010-4-9 20:44

谢谢丁老师。。。

作者: 勤知 时间: 2010-4-22 12:42

谢谢丁老师

作者: Angela 时间: 2010-5-24 17:35 标题: 求教

“存在一定风险，就是怕粘住了下不来，要等冻透了才行，拿下来时有可能是不该下来的那面先下来了”
请问这个问题如何解决啊？

作者: 元始 时间: 2010-5-29 22:10

感谢丁老师

作者: 阿容 时间: 2010-6-9 02:29

谢谢丁老师，总结得很好，受益匪浅

作者: 王华 时间: 2010-6-21 14:27 标题: 全国冰冻比赛的一些感想

我是个不太喜欢上网的人，主要是要干的活很多，要学的东西也很多，所以上网都是在科室上，下班了就安心的看书，我家没装电视没装网线，科室的研究生给我起了一个绰号“文明原始人”，呵呵.....
今日周六来科室值班就上网看看，看到丁老师关于全国冰冻切片比赛的帖子，有些小感想，就和丁老师好好聊聊啦！我的一些观点不是很成熟，丁老师别取笑哦！
丁老师真是“火眼金睛”啊！比赛时，为了快速冷冻组织、利于切片，我的组织的确是在冷冻的过程中翻转过来压了一下。丁老师说的风险的确存在，不过只要掌握好时机也能确保无虞。我的小“伎俩”是：组织托放在冻台上预冻后先加一小层胶，待胶的下1/3变白时将组织放上（放上之前组织要用滤纸吸干游离的水分，很重要），在组织周围再补一些胶，等胶与组织的下2/3变白但表面尚透明时及时将托翻转5秒后再正转过来，翻转时不能用力压，要保持组织的自然结构。经过这样处理，组织冷得快，翻转时也不会有掉下来的危险！丁老师说我的组织很大，呈圆形可能是压出来的，其实也不算是啦！我得到的那块肝组织的确是超级大，估计是不是我最后一个操作，取材的老师额外的照顾我啦？！
因为比赛时冰冻切片机的温度是不能随意调节的，为了切好肝组织，我的切片顺序是肝—肾—肠，在肝组织没完全冻透时就开始粗刨，待到切片时肝组织的温度还不是太低，所以切片很顺利。如果组织太冷，用手去捂，可以解决裂纹的问题但组织在一冷一热的作用下，细微的组织结构会受到很大影响！
关于组织掉片的问题，我平时做冰冻切片时软组织从来不会出现掉片的，但在比赛时其中一片肝组织切片居然掉了4/5，还好另一张只有轻微的掉片，真是万幸啊！个人分析原因：玻片表面不够光洁。这样说话，估计玻片供应商可能会很有意见。声明：仅为个人意见哦！
冰冻切片比赛中一个很重要的问题：选手们选用的冰冻固定剂是影响切片染色质量的重要制约原因。冰冻固定液需要改良啦！我在比赛时使用的是改良型Bouin固定液（我科平时也用该固定液，比赛前我们要求大会提前配好的）。固定液直接影响切片染色的好坏，当然规范的操作也很重要，但固定液不理想，切得再好也染不出好效果的！改良型Bouin固定液（苦味酸75％酒精饱和液75ml，甲醛溶液10ml，丙酮10ml，冰醋酸5ml，醋酸钠1克混合）。
这反映出目前我们病理技术需要解决的问题：加强基础知识的再学习！什么是病理技术的基础知识？是各种有关病理技术的专业书籍吗？远远不够！是基础化学，基础有机化学，染料化学、生物化学，分子生物学，病理学、组织学、甚至包括量子物理学和哲学等等！医学版的基础化学、基础有机化学是不够用的，要好好看看理工科版本的化学教科书。我们在本科学过的化学知识基本上都还给老师啦！病理技术工作者没有坚实的理论基础如何形成发散性思维？如何有创新性灵感？如何形成精准的直觉？再学习不光是为了巩固基础理论，更重要的是要跟上科技发展的步伐，让相关学科的先进知识能与病理技术产生新的“交汇点”，加快病理技术的发展。病理技术工作者不光要善于观察眼睛看的到的事物，更重要的是要能体会眼睛看不到的东西！病理技术工作任重而道远啊！呵呵......这是我对病理技术“理论架构”的个人理解，您别取笑哦！
对丁老师发的几张照片的一些个人见解：
冰脆1：肝细胞核中间，胞浆出现空泡样间隙，估计是组织冻得太冷，切片时用手捂过切下的第一张切片。一冷一热就造成了细胞结构的改变。丁老师说的改变冷冻温度是最好的方法！但如果不能改变温度的情况下，用手捂过之后，弃去3~5张切片再贴片可以改善此类状况。
冰晶多（细胞间）：个人认为那不是冰晶，而是使用了AFA或AF固定液或其他的脱水效果强大的固定液而导致的肝细胞收缩，肝索脱水变细导致肝窦增宽。
我们对经常使用的“冰晶”一词会不会是有所误解呢？
我还是一个刚刚上路的新手，以上只是我的一些小小见解，说的不对请丁老师多多包涵啊！

作者: dingwei 时间: 2010-6-24 20:55

您说得非常好，佩服，学习了

象您这样的技术员太少了。都象您一样，我们的技术员就不会被人看不起，被人歧视了。在中国，病理技术行业是很悲哀的，很少会有医生真正尊重你，大多数是嘴上说的好听，骨子里看不起。所以要靠我们自己努力阿，知识才是力量。
冰晶的问题我去好好研究一下，有个疑问：如果全是固定液引起的收缩，不是冰晶，那为什么速冻后会减少甚至没有呢？好象有点解释不通。强固定剂会有收缩作用那是肯定的，甲醇的收缩性比丙酮小的多，所以我们选择了甲醇。我们再试一下，找找真正的原因如何？

作者: 王华 时间: 2010-6-27 14:34 标题: 回复 16# 的帖子

我认为要理解冰冻后组织细胞的改变，首先要理解组织在活体状态下的结构。以下是我引用的一些书上的知识：
细胞原生质除有形成分外，还有可溶相胶态成分，称为细胞基质。
生活状态下的基质有一定的弹性和黏滞性，受温度、光线、水压、离子状态等因素的影响而有一定的改变：即溶胶和凝胶的相互转变。
现代研究发现，基质并非是匀质状的，其中含有极微细的网状结构，在不同情况下的基质胶态变化或许与这种微梁结构直接相关。
在细胞基质中，多数水分子以水化物的形式结合在蛋白质或其他大分子的极性区域，部分水分子呈游离状态。
-------以上知识来源于《现代组织学》2003年版第80页，编者：成令忠
关于溶胶的稳定因素及聚沉现象在医学本科教材《基础化学》第6版75页也有相关描述。
同等质量的冰的体积是水的两倍。（物理学常识）
组织是由细胞组成的，细胞间有细胞外液，细胞内有细胞内液，胞浆中的细胞器、酶、电解质等物质其实类似于“悬浮”在细胞基质中。

基于以上知识的个人理解，下面我谈谈对于冰冻切片中的一些现象的理解，生命现象是很复杂的，我的理解或许还很肤浅，说出来和丁老师探讨一下。
组织速冻产生的“冰晶少”：原因有二：1、水分快速凝固成冰，细胞内基质几乎同时凝固膨胀，细胞基质的微梁结构破坏较少，胞浆内的细胞器等有形物质基本能保持在原位。2、因为胞浆中的大部分水是以水合物形式结合在蛋白质或其他大分子的极性区，速冻可以阻止水分子游离出来，保持基质的匀质。
组织冷冻慢，在温度缓慢下降的过程中，一是细胞基质的微梁结构和溶胶状态受到影响导致细胞器等有形物质的聚集与沉降；二是在细胞冷冻凝固之前，水分子与极性大分子间的氢键受到破坏，使以水合物形式存在的水分子游离出来，基质中的微梁结构又受到破坏，使得游离水聚集在一起，游离水聚集的地方在冰冻切片胞浆中成为空洞样结构，也就是的所谓“冰晶”。
以上的理论基础也可以解释：一、为什么捂过之后的冰冻组织切片上胞浆形成很多空洞，胞核内染色质边集等现象。二、为什么慢冻组织比速冻组织更容易形成“冰晶”。
做得好的冰冻切片应该和常规HE切片一样好看！冰冻切片还有一个常规切片没有的优势：冰冻切片的组织形态结构与活体状态更为接近，常规脱水过程中组织细胞或多或少会收缩，不同的组织收缩度不同，使组织形态结构与活体状态有所差距呢！

以上纯属个人观点哦！非常希望能得到丁老师的指导！

作者: 王华 时间: 2010-6-27 14:46 标题: 回复 16# 的帖子

要理解各种冰冻固定液的特点，首先得从理解各种固定液对组织的固定原理开始，我看了一些书，但还不能很系统很完整的描述，也希望丁老师研究研究，咱以后再交流这个问题。呵呵。。。。。。给丁老师“布置任务”啦！您千万别生气哦！

作者: 王华 时间: 2010-6-27 14:56 标题: 回复 16# 的帖子

要理解胞浆基质溶胶状态在冷冻后会有什么改变，有一个比较形象的方法：买一个果冻放到冰箱里冻结后拿出来解冻，看看会有什么改变？
当然啦，生命现象比果冻要复杂得太多啦！
其实微观世界在宏观世界里也能找到相似之处的！“窥一斑而知全豹”“一滴水也能看到整个海洋”“一叶而知秋”也！
哲学思辨过程要渗入生活、工作、甚至生命啊！

作者: dingwei 时间: 2010-6-27 16:13

哈哈，太好了，关于冰晶的理论你说得非常正确，我很喜欢有人提出不同意见，只有这样，才有可能把自己的错误观点纠正过来。对这我从不生气，我经常让我的学生提不同意见，做各种对照实验，这样才能进步，一个人懂得知识是有限的。对于固定液，我好久没搞了，也应该认真再研究研究。
向你好好学习，以后多多交流。

作者: 王华 时间: 2010-7-1 18:15 标题: 请问丁老师是否知道目前哪个医学院校设有病理技术专业？

我想了解一下课程设置。

作者: 王华 时间: 2010-7-2 13:23 标题: 回复 20# 的帖子

从丁老师写的文章就看得出来，您是个好学、敬业、严谨的人，要好好向丁老师学习！丁老师病理技术经验很丰富，而我只是一个初学者，干病理技术还不到四年，还有很多东西要向您学习啊！现在我的重点还在打基础，扩大知识面。“磨刀不误砍柴功”，基础理论知识的学习决定了将来病理技术的高度！

作者: dingwei 时间: 2010-7-2 13:25

相互学习

作者: 刘涵 时间: 2010-7-8 22:33

丁老师是个对病理技术非常钻研的人，大家都应该向他学习。

作者: 无语 时间: 2010-7-31 11:59 标题: 回复 1# 的帖子

受益匪浅，谢谢丁老师

作者: ZHIPIANREN 时间: 2010-9-18 01:09

这次冰冻比赛我也去了，丁老师总结的非常好，准确、清晰。通过这次的比赛我也学到了许多好的技术技巧和经验。现在正在努力找不足，尽力使工作规范化，力争缩小差距。更好的提高自己的技能。

作者: 6504339 时间: 2010-9-20 14:49

学习了

作者: boleyn1986 时间: 2011-5-4 19:59

谢谢指导领教了

作者: xiaoniou777 时间: 2011-5-4 22:53

我们做技术的难得有机会出去学习。我也去参赛了，可是不明白比赛结束想去看看获奖选手的片子怎么就那么难呢？我们去看看也是想更好的提高自己，真是遗憾。

作者: dingwei 时间: 2011-5-5 07:46

比赛有比赛的规定，一般来说，比赛的片子是不能随意看的，因为每个技术员心中的标准不一样，每个人都认为自己做的是对的，然后说这个片子比那个片子好，那个片子比这个好，整个比赛就乱套了，会造成很多不必要的矛盾。冰冻切片是给诊断医生看的，只有有经验的诊断医生的标准才是相对比较正确的标准。
但是，应该把好的片子与有问题的片子点评一下，放一下照片，说明一下问题的所在，原因及解决的方法，是很有必要的。我们比赛的目的是为了提高。

作者: 强子 时间: 2011-5-7 08:48

来了这么长时间，今天看见这个帖子才发现，原来除了丁陈等老一辈的老师们，像王华同学这样对基础、专业研究的这么透彻的年轻学员还是头一次见，不知道王姐您师从哪位啊，有空定要拜访一下，同时也让我认清了自己，真正的初生牛犊啊，努力学习！！！

作者: 王华 时间: 2011-5-8 15:09

当学习的东西越多，就越觉得自己还很肤浅！
不光要多多读书，更重要的是要多多思考！
不光是专业书籍，“杂书”也要多看，当拥有的知识广度与深度到达一定层面的时候，知识是融会贯通的！
要做好病理技术，不光要有理论知识，还要有实践经验的积累。
我只是一个初学者，要向各位老师多多学习啊！

作者: 强子 时间: 2011-5-8 19:07

作者: lee_ycl1989 时间: 2011-5-19 18:07

学习了

作者: 康华病理 时间: 2011-7-12 10:50

我觉得个人心态摆正了，一切都会变得简单一些！

作者: 康华病理 时间: 2011-7-12 10:55

个人非常赞同王华老师的观点！
书山有路勤为径，学海无涯苦作舟！
当你放眼去看宇宙的时候，你会觉得自己实在是太渺小了！

作者: fengdao919 时间: 2011-11-28 18:25

学习一下

作者: wxhwxh 时间: 2012-12-30 09:59

王华老师确实牛，向你学习！！

作者: wxhwxh 时间: 2012-12-30 15:53

有没有常规切片全国性的比赛？

作者: wuhuanziyu 时间: 2013-1-7 13:41

作为一个才接触冰冻切片不久的新人，看了此贴颇有感悟，也发现了我的一些错误操作。感谢分享

作者: 爱星星的破孩 时间: 2015-10-14 09:48

问一下，一般核浆共染是由什么原因导致的呢？

作者: haoziwansui 时间: 2015-10-14 23:19 标题: 回复 6# 的帖子

丁老师，你好，我们湖南这边冰冻基本是切5μ 淋巴组织4μ。脂肪较多等乳腺才切7μ。为何这次比赛常规切5-7μ合适呢？

作者: dingwei 时间: 2015-10-15 07:58

１、因为比赛用的机器是新的，一般切的都比较薄。２、切的不是淋巴组织。

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