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免疫组化的阴性、阳性对照

时间:2014-11-18  阅读:17621次

免疫组化的阴性、阳性对照


免疫组化规范化的重点在于每天的操作过程中,每一种抗体,必须设有阳性和阴性对照片,并根据阳性、阴性片的结果来判断当天的实验结果是否正确,这是确保免疫组化结果正确性的唯一标准。


阴性对照主要是为了排除阳性结果是否存在内源性生物素、内源性过氧化物酶和其它的非特异性着色。在日常工作中最常见的是采用缓冲液替代一抗的方法。而现在,由于非生物素化检测系统的普遍使用,阴性对照常常被人们所忽视。实践证明,当抗体浓度过高(或抗原修复过度、检测系统与一抗浓度不匹配等原因)时,也会出现非特异性着色,因此,选择替代法阴性对照和用该抗体在正常浓度下不表达的组织(肝、肾组织存在很多的内源性生物素,有部分抗原过修复过度或抗体浓度过高时,也会出现非特异性着色,可作为阴性对照组织的一种)做成阴性对照,与被检组织一起染色(所有步骤一样,也需要加一抗),也是非常重要的。


阳性对照又分自身对照和已知阳性组织对照。自身对照是指被检组织内存在已知抗原的正常组织,自身对照结果阳性,说明本次实验操作过程是正确的,使用的抗体也是正确的,但不代表抗体稀释比是正确的,因为自身对照的组织都是正常组织,抗原表达很强,用很低的抗体浓度,就能有很好的表达,而肿瘤抗原通常表达都较弱,往往需要正常的稀释比才能正确表达,如果抗体浓度低,会出现假阴性的结果。同样,选择结果强阳性的肿瘤组织做阳性对照片,效果和自身阳性对照也是一样的。


所以我们在选择对照片时应该选择:阳性表达较强、中等强度、较弱以及阴性的四种组织(如C-erbB-2,可选择1+2+3+,阴性组织)包在一起或做成组织芯片,与待检组织一起检测,只有当三种强度的组织表达均正常、阴性组织不着色时,这样的实验结果才是最可信的。


值得注意的是,用作对照片的切片最好是现切现用,如果需要事先切片,一般不要超出一周,因为少数阳性组织在切片后,保存数日内就出现阳性结果减弱的现象。


 




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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