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塑料包埋制片技术

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:19922次

树脂包埋法又称塑料包埋法,是将组织标本包埋在坚固的塑料聚合体(有机玻璃)中制作切片。用于包埋的材料有:①丙烯酸类,包括甲基丙烯酸羟乙基酯(hydroxyethyl methacrylate,HEMA或glycol methacrylate,GMA)和甲基丙烯酸甲酯(methyl methacrylate,MMA);②环氧树脂类,包括Epon812、Spurr和Araldit;③聚酯类,包括Vestapol。HEMA材料最为常用。
树脂包埋主要用于骨髓活检,无需脱钙,组织及细胞收缩小,细胞细微结构形态清晰,有助于对造血细胞的识别。塑料包埋制作切片时,不必脱去作为包埋介质的塑料,便可直接进行各种染色。可进行脂肪染色和多种酶类染色。
1、一般组织与常规石蜡切片固定脱水流程一致,但无需二甲苯透明;骨髓组织宜用Bouin'液固定液,小标本可以不脱水。
2、浸透:取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯(HEMA)84ml,聚乙二醇(PEG-400)6ml,过氧化苯甲酰0.6g,混匀溶解为浸透液,后置于棕色瓶,4℃备用。浸透时间为12-24小时,其间更换一次浸透液。
3、包埋:
A液:即浸透液。
B液:PEG-400 15ml,N-N二甲基苯胺1ml混合,摇匀溶解后置于棕色瓶,4℃备用。包埋剂必须在使用前配制,按A、B二液以100:23的比例混合,稍加搅拌便可使用。经浸透的组织块置于塑料模具内,注入包埋剂,放置30-60分钟(室温高于18℃可放置于冰箱中),待包埋剂完全渗入组织后,在包埋模具上加盖,在室温中放置,使其聚合,成型后便可切片。
6、 切片:先用钢锉修整聚合块,四周尽量修至靠近组织,表面修至组织完全暴露,用常规石蜡切片机切片。切片厚度可切1~2цm。
7、 展片与烤片:用40~42℃水温展片,捞至干净载玻片,60~80℃的温箱烤片1小时左右。
8、 染色与封片:塑料切片染色前不必脱去包埋剂,直接染色。苏木素3分钟,水洗,盐酸酒精分化1~2秒钟,水洗,温水蓝化,伊红2-5秒钟,水洗,吹干后中性树胶封固。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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