返回首页
设为首页
加入收藏夹
进入病理技术论坛
首页 技术精华 病理资讯 同行交流 技术会诊 点滴经验 常规切片 特殊染色 免疫组化 分子病理 细胞园地 细胞制片 电镜技术 病理图库
 首页 > 常规切片 > 正文
脱钙液

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:42216次

      所谓脱钙,就是用化学或物理的方法把组织内的磷酸钙和碳酸钙去除。
      脱钙的方法很多,硝酸脱钙速度很快,但细胞核不容易上色,对抗原也影响较大。EDTA、电解等方法染色效果较好,对抗原保存好,但脱钙时间较长。配方有很多,很难说那个好,那个不好,主要要根据你处理的组织类型、要求以及允许你完成脱钙的时间,在什么时间完成脱钙。10%硝酸,脱钙能力很强,速度很快,如果在刚脱完后就立即中止,效果也很好。但由于脱钙速度快,不容易控制时间,日常工作中不可能过几分钟就去看一下,所以容易脱钙过度,导致细胞核无法上色。

脱钙的原则:
1、要能切片。2、染色对比要鲜明,最起码细胞核能染上色。3、尽可能保存抗原。4、时间要快,但要容易控制。

脱钙的关键:
1、不能脱过了。
2、脱钙后流水冲洗要充分。

因此,选择一种合适的脱钙液及处理方法,非常重要。现介绍几种适合日常工作常用配方如下:

1. 骨髓组织:

    可用Bouin液(饱和苦味酸水溶液75ml+甲醛20ml+乙酸5ml)固定24~48 小时,骨质较硬的还可用甲酸盐酸液(甲酸5ml+氯化铝7g+盐酸8.5ml,加水至100ml)或10%盐酸甲醛液(10ml盐酸+10ml甲醛+80ml水)脱钙0.5~1小时,流水冲洗1~2 小时,放入常规流程固定脱水。如果用4%甲醛固定,然后再脱钙,会造成细胞收缩(核变小、胞浆空洞化)、核染色质不清晰。

2. 钙化、疏松骨组织:

    可用甲酸盐酸液(5ml甲酸+ 7g氯化铝+ 8.5ml盐酸+10ml甲醛,加水至100ml)或10%盐酸甲醛液脱钙6~24小时,流水冲洗3~4小时,放入常规流程固定脱水。较硬的角质层、瘢痕等组织也可用10%盐酸甲醛液(或10%乙酸)软化。

3. 致密骨组织:

    锯成薄片,用30%盐酸甲醛液(30ml盐酸 + 10ml甲醛 + 60ml水)脱钙数小时至数日,用针检查脱钙效果,容易刺穿后中止,流水冲洗3~4小时,放入常规流程固定脱水。

4. 切片过程中发现蜡块有钙化或脱钙不彻底:
    可将蜡块直接脱钙将蜡块组织面修出后直接放入10%或30%盐酸甲醛液1~3 小时(也可用10%硝酸30~60 分钟),流水冲洗5~10 分钟,然后直接切片。注意只要脱到能切几张就可以了,不要过度,否则钙质完全脱去后会造成组织软化直至无法切片。


其他脱钙液:

1、硝酸-间苯三酚液:
浓硝酸10ml,间苯三酚1g,通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸 100ml。骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。
优点:该液脱钙速度非常快,大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点:
(1)细胞核染色很差。
(2)如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少24小时。
(4)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。

2、硝酸水溶液:浓硝酸5-10ml,蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。
优点:
(1)硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
(2)对组织损害较少,细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
(3)组织可直接通过70%乙醇去除酸。
缺点:脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。

3、福尔马林-硝酸液:40%甲醛5ml,浓硝酸10ml,蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。
优点:
(1)福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
(2)该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
(3)可作为紧急活检脱钙用。
(4)该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
缺点:
(1)该液对细胞核作用较慢,使细胞核着色较差。
(2)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少12小时。

4、Perenyi’s 液:
10%硝酸4份,0.5%铬酸3份,无水乙醇3份。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点:
(1)该液是一种温和的脱钙液,可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
(2)细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
(3)推荐该液作为常规脱钙使用。
(4)组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点:
(1)脱钙较慢,因此,紧急情况下不能使用。
(2)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。

5、Von Ebener’s液:
饱和水溶液氯化钠 50ml,蒸馏水50 ml,浓盐酸 8 ml。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点:
(1)细胞核染色相当好。
(2)不需要水洗,脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点:使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。

6、甲酸液:
甲酸 10ml,10%福尔马林盐 90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点:
(1)脱钙同时可以对组织固定。
(2)对细胞核染色比较好。
(3)推荐用于小块组织和牙齿脱钙。
缺点:
(1)脱钙比较慢,不推荐作为常规标本脱钙使用。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少18小时。

7、三氯醋酸液:
三氯醋酸5g,10%福尔马林盐95ml。厚度5mm骨组织块脱钙时间需要5-8天。
优点:
(1)对细胞核染色好。
(2)脱钙之后不需要水洗,酸乙醇可以去除。
缺点:
(1)脱钙作用慢,仅仅推荐用作骨的细针脱钙。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。

8、Flemming’s液:
1%铬酸 15ml,2%四氧化锇 4ml,冰醋酸 1ml。
       Flemming’s液虽然是一种固定液可作为微细骨针脱钙用。液体需要新鲜配制,并在容器底部会形成沉淀。脱钙后如果直接通过乙醇可以形成不能溶解的色素。脱钙之后标本必需充分流水冲洗去除过多的铬盐。使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。用苏木精染色时细胞核受抑制。

9、AFIP甲酸-柠檬酸钠液:
A液:甲酸25ml,蒸馏水25ml。B液:枸橼酸钠(结晶)10g,蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合,每日换1次,因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合,具有促进脱钙的作用。

10、蒋维中(Jangweizhong’s)液:
盐酸80ml。甲酸70ml,三氯化钙50g,冰醋酸25ml甲醛100ml,生理盐水900ml。
此液脱钙迅速,0.5cm厚的松质骨6-20小时就可以完成脱钙。对组织影响极小,染色效果好。配制简便,脱钙后不需要用碱性液中和。

11、螯合脱钙剂脱钙法
EDTA是一种良好的脱钙液螯合剂,它对组织破坏极小,不产生气泡,不影响染色,如果加温至37℃,可以加快脱钙速度。
EDTA脱钙液:
乙二胺四乙酸(EDTA)5.5g,10%中性福尔马林100ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要7-21天。
优点:
(1)经EDTA脱钙的组织染色结果好。
(2)对组织的结构损害小。
(3)用化学方法测试可以确定脱钙的终点。
缺点:
(1)脱钙速度相当慢,不适合常规标本脱钙使用。
(2)脱钙后组织会稍微变硬。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

【字体: 】【发表评论】【打印】【关闭
ico 论坛最新贴子
关于我们
  本站自1998年成立以来首次改版,从病理技术方面做全做深,新增了病理技术理论知识、病理资讯、病理图库及技术精英等功能。我们的宗旨是传播一种积极的思想,提供一些理论和实践的知识,为朋友们解决一点实际的问题,想您所想的,关心您关心的,希望病理技术网能成为全国病理工作者学习和交流的场所。
© Copyright 1998-2017 www.zhbljs.com,All Rights Reserved.
业务联系:DingWei(QQ:891232) 广告联系:CoastChen (QQ:37784) 技术支持:12900.COM