返回首页
设为首页
加入收藏夹
进入病理技术论坛
首页 技术精华 病理资讯 同行交流 技术会诊 点滴经验 常规切片 特殊染色 免疫组化 分子病理 细胞园地 细胞制片 电镜技术 病理图库
 首页 > 常规切片 > 正文
冷冻切片

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:30151次

一、  恒温冷冻切片
 将组织在恒温冷冻切片机里切片。冷冻腔内的温度一般设置为-18至-25℃,根据不同组织调节不同的腔温,平时应将冷冻头放置于冷冻台上。冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态。
(1)、 当冰冻组织取好后,有速冻开关的机器可先将开关打开,再在冷冻头上放少量的OCT或羧甲基纤维素(可用普通胶水代替),放上组织,速冻。
(2)、 待组织冻结后,将冷冻头装到切片机上
(3)、 粗切,修出切面细切几张,用毛笔刷去刀上组织片
(4)、 放下抗卷板,开始切片,切片厚度一般为5~6微米,切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定,固定时间为10~20秒
(5)、 水洗
(6)、 苏木素1分钟
(7)、 水洗
(8)、 盐酸酒精分化1秒钟
(9)、 水洗
(10)、温水蓝化
(11)、伊红2~5秒钟
(12)、梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

冰冻切片的注意事项:
(1) 速冻:是冰冻切片的关键,因为只有速冻才能减少组织内的冰晶,最好的办法是将速冻头迅速压在组织上,冻好后就可切片。特别适用于较脆的组织。而含有脂肪较多的组织,最好放在液氮里处理。在液氮里冷冻要注意不要冻过头,2~3秒钟就要拿出来看一下,只要有4/5的组织已经冻住就可以了,待冷冻头拿出后刚好全部冻住,否则就会引起组织发脆,或冷冻头与组织分离。
(2)固定:切片后应立即放入甲醇冰醋酸中固定,不能等切片干后再固定,后者容易造成细胞退变。固定液有很多种,根据我们的实践,认为甲醇作用快,收缩小,染色较清晰,是冰冻切片最理想的固定液, 而每97ml加入冰醋酸3ml,会减少某些胶质、钙质较多的组织不容易掉片。
(3)包埋剂:可用普通胶水代替,但要加入适量的水(胶水与水的比例大约在2:1左右)。太稀了,容易损伤切片刀;太稠了,粘在切片上不容易洗掉,影响切片的质量。
(4)冰冻用切片刀不仅要磨的快,而且要磨的直,否则切出的片子就不会平整,不能进入抗卷板。最好能使用一次性刀片。
(5)如组织发脆,可等几分钟后再切,也可用手在组织上稍稍加温;如果用手去摸组织块,最好戴手套,或用玻片间的纸夹在手与组织之间,以防感染。
(6)冷冻室的温度冬天一般设在-19℃左右,夏天设在-22℃左右。不同的组织,有不同的温度要求:肝脏、甲状腺组织温度控制在-15℃左右,脂肪组织一般在-35℃以下。
(7) 冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态,经常的开关机器电源容易造成压缩机损伤。

二、半导体制冷切片
(1) 组织放置在半导体制冷台上,加少量水,调好切片的厚度
(2) 接通循环流水后,再接通电源,在使用的全过程中不能中断流水,等电源关上后才能停水。并且正负极不能接反,用整流电源控制温度。冷冻组织周围的水不能过多
(3) 待组织发硬到可切成厚薄一致的切片时,即可切片。切片厚度5~6微米,切片用毛笔展平后,立即放入甲醇冰醋酸液中固定,固定时间为1分钟
(4) 苏木素1分钟
(5) 水洗
(6) 盐酸酒精分化1秒钟
(7) 水洗
(8) 温水蓝化
(9) 伊红2~5秒钟
(10) 梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

三、二氧化碳冷冻切片 
a) 先将组织放入加热的20%甲醛溶液中固定1~2分钟,水洗(也可将组织不经固定直接放在切片机的冷冻台上)
b) 放在切片机的冷冻台上,加少量水,打开二氧化碳开关,此时有二氧化碳气体喷出,待组织出现冷霜后,关闭二氧化碳
c) 切片,切片厚度6~8微米,将切出的片子放于水中舒展,用镊子将组织平铺于载玻片上(如未固定组织的切片直接用载玻片粘贴,立即放入甲醇中固定2秒,然后进行染色,)
d) 加热烤片,烤片温度不宜超过60℃,更不能将组织烤焦。
e) 染色时将苏木素滴加在载玻片上,加热1分钟(60℃左右,不能将苏木素烧开,以防切片脱落)
f) 水洗
g) 盐酸酒精分化1秒钟
h) 水洗,温水蓝化
i) 伊红2~5秒钟
j) 梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

【字体: 】【发表评论】【打印】【关闭
ico 论坛最新贴子
关于我们
  本站自1998年成立以来首次改版,从病理技术方面做全做深,新增了病理技术理论知识、病理资讯、病理图库及技术精英等功能。我们的宗旨是传播一种积极的思想,提供一些理论和实践的知识,为朋友们解决一点实际的问题,想您所想的,关心您关心的,希望病理技术网能成为全国病理工作者学习和交流的场所。
© Copyright 1998-2017 杭州游刃文化艺术策划有限公司,All Rights Reserved.
业务联系:DingWei(QQ:891232) 广告联系:CoastChen (QQ:37784) 技术支持:12900.COM