纤维素
   一、马休黄-酸性品红-苯胺蓝法（改良Lendrum,1962）
试剂配制：
（1）青石蓝染液：酸铁铵5g，馏水100ml，青石蓝（celestine blue B）0.5g，甘油14ml，香草酚）50mg
用三角烧瓶盛蒸馏水，加入硫酸铁铵，不断摇动使其完全溶解。再加入天青石蓝，煮沸2-3分钟，在煮沸时用玻璃棒轻轻不断搅动。冷却后过滤，最后加入纯甘油和麝香草酚
（2）Mayer氏苏木素：苏木素0.1g，蒸馏水100ml，碘酸钠20mg，硫酸铝铵5g，柠檬酸0.1g，水合氯醛5g
苏木素在蒸馏水中完全溶解（必要时间稍加温），再加碘酸钠及硫酸铝铵，不断和玻璃棒搅动使硫酸铝铵完全溶解，最后加入柠檬酸与水合氯醛，过滤后即可使用。
（3） 马休黄染液：马休黄（Martius yellow）0.5g，95%酒精100ml，磷钨酸2g
先把马休黄溶于95%酒精，再加入磷钨酸。
（4）酸性品红液：酸性品红（acid fuchsin）1g，蒸馏水98ml，冰醋酸2ml（5）苯胺蓝染液：苯胺蓝（aniline blue）0.5g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml（6）1%磷钨酸水溶液：磷钨酸1g，蒸馏水100ml
（7）1%醋酸水溶液：冰醋酸1ml，蒸馏水99ml
操作方式：
1、 组织固定于甲醛氯化汞液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2、切片脱蜡至水，并进行除汞处理：
（1）切片于0.5%碘酒精液作用10分钟。
（2）水洗。
（3）5%硫代硫酸钠脱碘5分钟。
（4）流水冲洗10分钟。
3、天青石蓝液染2-3分钟。
4、水洗。
5、Mayer氏苏木素染2-3分钟。
6、水洗。
7、1%盐酸酒精分化。
8、流水冲洗10分钟。
9、95%酒精稍洗。
10、 马休黄液染2分钟。
11、 蒸馏水稍洗。
12、 酸性品红液染10分钟。
13、 蒸馏水稍洗。
14、1%磷钨酸水溶液处理5分钟。
15、蒸馏水稍洗。
16、苯胺蓝液染5-10分钟。
17、1%醋酸水溶液洗去多余染液并分化。
18、不水洗，直接用滤纸吸去周围水份。
19、95%酒精急速脱水，再经无水酒精。
20、二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：纤维素鲜红色，肌纤维红色，胞核蓝褐色，胶原纤维蓝色，红细胞黄色，陈旧的纤维素紫蓝色。

二、苯酚结晶紫法（Weigert法）
试剂配制：
（1）碳酸锂胭脂红液：胭脂红（carmine）2g，碳酸锂饱和水溶液（约1.2%）100ml，麝香草酚100mg
把胭脂红溶于碳酸锂饱和水溶液，慢火煮沸10分钟，冷却后加入麝香草酚，用前过滤。
（2）5%苯酚水溶液：苯酚 5ml，蒸馏水95ml（可稍加温使其溶解）
（3）结晶紫酒精液：结晶紫（crystal violet）5g，无水酒精100ml，配后用小口砂塞瓶密封存放。
（4）苯酚结晶紫染液：结晶紫酒精液1份，5%苯酚水溶液9份
（5）Weigert氏碘液：碘片（iodine）1g，碘化钾2g，蒸馏水100ml
（6）苯胺二甲苯液：1份苯胺（aniline），二甲苯3份
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 碳酸锂胭脂红液滴染5-10分钟。
3、 直接滴入1%盐酸酒精半分钟。
4、 流水冲洗5分钟。
5、 用苯酚结晶紫液滴染5分钟。
6、 倾去染液，用滤纸稍吸干切片周围染液。
7、 Weigert氏碘处理1-2分钟。
8、 水洗后用虎纸彻底吸干水份。
9、 苯胺二甲苯分化，并摇动切片使分化均匀。必要时要更换新的分化液，至无颜色脱出，立即倾去苯胺二甲来。
10、 滴入新的二甲苯，以除去苯胺，然后在镜下观察。如分化不足，可再滴上苯胺二甲继续分化，至切片清晰为止。
11、 用二甲苯反复滴洗数次，彻底把苯胺除去。
12、 中性树胶封固。
结果：纤维素呈蓝紫色，胞核红色。革兰氏阳性细菌也呈蓝紫色。

　　　　　　　　　　淀粉样蛋白
一、甲基紫法（ Jurgens，1875）
试剂配制：
（1）1%甲基紫水溶液：甲基紫（methyl violet）1g，蒸馏水加至100ml
（2）1%蜡酸水溶液：冰醋酸1ml，蒸馏水99ml
操作方法：
1、 组织固定于10%甲醛液，按常规脱水包埋。（用冰冻切片效果更佳）。
2、 常规脱蜡至水。
3、1%甲基紫水溶液染3-5分钟。
4、水洗，在镜下观察。
5、1%蜡酸水溶液分化，直至见淀粉样蛋白呈紫红色或红色，胞核呈蓝紫色。6、流水稍冲洗。
用阿拉伯树胶封片。或把切片自然凉干后，用中性树胶封固。
结果：淀粉样蛋白呈紫红色至红色，胞核、胞质、结缔组织呈蓝色至深浅不同的紫色。
注意事项：1、如无甲基紫，也可用结晶紫代替，同样可获得异色反应。
2、切片不能用酒精脱水，因为此染料溶于酒精而立即脱色。
3、切片也不宜用甘油明胶封盖。

二、甲醇刚果红法（改良的Highman）
（1）甲醇刚果红液：刚果红（congo red）0.5g，甲醇80ml，甘油20ml
（2）碱性酒精分化液：氢氧化钾0.2g，80%酒精100ml
操作方法：
1. 切片脱蜡至水
2. 甲醇刚果红染液染10～20分钟
3. 用碱性乙醇分化液分化数秒
4. 水洗
5. 苏木素复染2分钟
6. 水洗
7. 脱水,透明,封固
结果：淀粉样物呈桔红色。

　　　　　　　　   尿素结晶
黄醇冰醋酸法（Oliver，1921）
试剂配制：
黄醇冰醋酸液：黄醇（xanthydrol）6g，无水酒精35ml，冰醋酸65ml
此液于临用前配制，先把黄醇溶于无水酒精和冰醋酸，待彻底溶解后即可用。操作方法：
1、尸解时切取不厚于2-3mm的脑组织小块，放入上述黄醇冰醋酸液内固定6小时。
3、 转入无水酒精补充固定和脱水2次，每次12-24小时。
3、再置入常规的无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚3-4μm。4、切片常规脱蜡至水。
5、明矾苏木素染核5分钟。
6、水洗。
7、1%盐酸酒精稍分化。
8、流水冲洗15分钟。
9、0.25%曙红液复染。
10、水洗。
11、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：尿素结晶呈棕黄色的放射状梅花形结晶，胞核蓝色，其他组织红色。注意事项：
1、黄醇冰醋酸液应于临用前配制，所取的组织块不可过厚。
2、尿素结晶极易溶解于水，不能用一般的水溶液固定剂固定，组织取好后必须立即放入黄醇冰醋酸液内固定。

　　　　　　　含铁血黄素
   普鲁士蓝反应：
试剂配制：
1. 2%亚铁氢化钾水溶液:   亚铁氢化钾 2 g ，蒸馏水 100 ml
2. 2%盐酸水溶液:   盐酸 2 ml，蒸馏水 98 ml
3. 0.1%沙红(safranine)溶液: 沙红 0.1 g， 蒸馏水 100 ml
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 取2%亚铁氢化钾水溶液和2%盐酸水溶液等份混合,滴在切片上，
   10～20分钟
3. 蒸馏水洗
4. 核复染
5. 水洗,脱水,透明,封固
结果：含铁血黄素呈蓝色。
应用：
    明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁血、出血；陈旧性出
血灶；肝硬化时慢性脾郁血的含铁结节；硬化性血管瘤；动
脉瘤性骨囊肿；绒毛色素性滑膜炎等。

　　　　　　　胆色素
三氯醋酸三氯化铁法（Hall）法：
试剂配制：
    Fouchet液：三氯醋酸25克溶于蒸馏水100毫升内，再将三氯化铁1克溶于10毫升蒸馏水内并加入到三氯醋酸里，混合，棕色瓶贮存。
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入Fouchet液中染30～60分钟
3. 蒸馏水洗2分钟
4. 在Van Gieson 液中复染1～2秒钟（淡染）
5. 水洗，60℃温箱中烘干，二甲苯透明，树胶封固。
结果：胆红素呈绿色，其他如复染呈红色和黄色。
应用：
胆色素主要的化学成份是胆红素和橙色血质。胆红素为黄褐色颗粒或同质性团块，它在肝细胞内形成。当胆道梗阻或胆红素代谢障碍时，胆红素被肝的星形细胞吞噬，如肝细胞发生变性，也常有胆色素沉着于其胞质内，毛细血管和小胆管腔内则形成胆汁“栓子”。阻塞性黄疸时，肾曲管上皮细胞有胆色素，并可在肾小管腔内形成胆汁管型，然而在溶血性黄疸则否。

 　　　　　　　　黑色素
（1） 漂白法：
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入0.25%的高锰酸钾2-4小时
3. 蒸馏水洗
4. 入1%草酸处理1-2分钟
5. 水洗,核复染,脱水,透明,封固
结果:经处理后的切片如色素被脱色,说明是黑色素。
　
（2）LiLLie亚铁反应法：
试剂配制：
 硫酸亚铁溶液：硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）2.5克溶于100ml蒸馏水中
 醋酸铁氰化钾溶液：铁氰化钾1克溶于1%醋酸溶液100ml中。
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入硫酸亚铁溶液60分钟
3. 蒸馏水洗多次
4. 入醋酸铁氰化钾溶液中处理30分钟
5. 1%醋酸水溶液中分化数秒
6. 水洗,可复染(Van Gieson或核固红)
7. 水洗, 60℃温箱中烘干，二甲苯透明，树胶封固。
结果:黑色素呈绿色。
注意：1. 醋酸铁氰化钾溶液和硫酸亚铁溶液需现配现用,不 能保存。
2.含铁血黄素有时也可呈绿色反应,所以,必要时应作铁染色。

 　　　　　　脂褐素
高碘酸-无色品红法（ McManus，1948）
试剂配制：
（1）0.5%高碘酸水溶液：高碘酸0.5g，蒸馏水加至100ml
（2）无色品红液：碱性品红（basic fuchsin）1g，蒸馏水200ml，1N盐酸20ml，偏重亚硫酸钠1.5g，活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g，放入200毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤，滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
4. 加活性2 g，摇晃，过滤，以无色为****。棕色瓶，4℃冰箱保存。
（3）0.5%偏重亚硫酸钠溶液：偏重亚硫酸钠0.5g，蒸馏水加至100ml
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 0.5%高碘酸水溶液氧化5-8分钟。
3、 流水冲洗2分钟，再用蒸馏水洗一次。
4、 入无色品红液，于室温下置暗处使用10-20分钟。
5、 直接用0.5%偏重亚硫酸钠溶液滴洗2次，每次约1分钟。
6、 流水冲洗5分钟。
7、 苏木素浅染胞核3-5分钟。
8、 水洗。
9、 1%盐酸酒精分化1-2秒钟。
10、 流水冲洗10分钟。
11、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：脂褐素呈大小一致的红色颗粒，胞核蓝色。
注意事项：
苏木素染胞核不可过深，否则会遮盖脂褐素的红色。

  　　　　　　　钙盐
一、硝酸银法（ Von  Kossa，1901）
试剂配制：
（1）1%硝酸银液：硝酸银1g蒸馏水加至100ml
（2）2%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠2g，蒸馏水加至100ml
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 蒸馏水洗。
3、 切片入1%硝酸银液置于强阳光处作用15-60分钟。
4、 蒸馏水洗3分钟。
5、 2%硫代硫酸钠液处理2分钟。
6、 流水冲洗5分钟。
7、 苏木素液染4-6分钟。
8、 水洗。
9、 1%盐酸酒精分化。
10、 流水冲洗10-15分钟。
11、 曙红液染2-3分钟，水洗。
12、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：钙盐呈褐黑至深黑色。
注意事项：
1、 钙盐的固定应使用中性缓冲甲醛液，不能使用酸性固定剂，因酸可溶解部分的钙盐。也不要采用10%甲醛钙固定液。
2、 硝酸银液的浓度由0.5-5%均可，采用1%的浓度，主要取决于暴光的亮度和时间，若暴露于强阳光下，需时15分钟已足，若暴露于紫外光灯下5-10分钟即可。

二、茜素红S法（ McGee-Russell，1958）
试剂配制：
茜素红S（alizarin red S）2g，蒸馏水100ml
等茜素红S溶解于蒸馏水后，用10%氢氧化铵调整其pH至4.2（每100ml茜素红S液，约加10滴%氢氧化铵）。
操作方法：
1、 组织固定于10%缓冲中性甲醛液，按常规脱水包埋。
2、 切片脱蜡至水。
3、 茜素红S液滴染3-5分钟。
4、 用滤纸吸干周围染液。
5、 入丙仁酮洗数秒钟。
6、 丙酮二甲苯（1:1）洗数秒钟。
7、 二甲苯透明二次，中性树胶封固。
结果：钙盐沉淀处呈橘红色。
注意事项：
1、 显微镜下控制，如染色时间过长，可出现扩散现象。
2、 此方法适用于含量较少的钙盐，因其显示橘红色而易于观察。

                                         铜染色

罗丹明染色法

试剂配制：

（1）DMAB-罗丹明贮备液：对二甲氨基苄罗丹明饱和于无水乙醇中，贮存液4℃保存。

（2）DMAB-罗丹工作液（充分摇动）：DMAB-罗丹明贮备液3ml，蒸馏水47ml，

使用前现配现用。

染色步骤：

（1）切片脱蜡至蒸馏水。

（2）用DMAB-罗丹明液60℃染色3小时（1小时后显微镜下检查）。

（3）蒸馏水冲洗。

（4）对比染色（颜色要浅些）用苏木精染5秒。

（5）盐酸乙醇分化。

（6）流水冲洗5分钟。

（7）脱水，透明，封固。

结果：铜沉积物-砖红色，核-蓝色，胆汁-绿色。

注意事项：

（1）染色时加已知的阳性对照片和切片一起进行染色，确保获得正确的结果。

（2）（步骤2）切片在60℃染色偶而出现一些染色背景。

（3）Depex封固剂中的二甲苯会过滤罗丹明的颜色，铜染色的颜色会显的模糊。

（4）封固观察切片之前不能长时间停留在二甲苯中，二甲苯会降低罗丹明颜色的强度。