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内分泌腺和胞质颗粒

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:19158次

        脑垂体细胞
一、高碘酸-无色品红-橙黄G法( Pearse,1953)
试剂配制:
试剂配制:
(1)0.5%高碘酸水溶液:高碘酸0.5g,蒸馏水加至100ml
(2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
(3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml
(4)天青石蓝染液:天青石蓝(celestin  blus  B)0.5g,硫酸铁铵 5g,蒸馏水100ml,纯甘油14ml,麝香草酚50mg
用烧杯中盛蒸馏水,加入硫酸铁铵,不断摇动使其完全溶解,再加入天青石蓝,用玻棒搅匀,煮沸2-3分钟。在煮沸时应轻轻搅动,防止天青石蓝聚于瓶底成片块状。冷却后过滤并加入纯甘油和麝香草酚。
(5) Mayer氏苏木素:苏木素0.1g,蒸馏水100ml,碘酸钠20mg,硫酸铝铵5g,柠檬酸100mg,水合氯醛5g
     苏木素在蒸馏水中使完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠和硫酸铝铵,用玻棒搅动使硫酸铝铵安全溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,过滤后即可使用。
(6) 橙黄G液:橙黄G(orange  G)2g,蒸馏水100ml,磷钨酸5g
 把橙黄G溶于蒸馏水,再加入磷钨酸,稍摇动使其溶解,静置一夜后,吸取上面的澄清液使用。
操作方法:
1、 切片脱蜡至水。
2、 0.5%高碘酸液氧化5分钟。
3、 流水冲洗2分钟,再用蒸馏水洗一次。
4、 入无色品红液,于室温暗处作用10-20分钟。
5、 直接用偏重亚硫酸钠液滴在切片上洗二次,每次约1分钟。
6、 流水冲洗3分钟。
7、 天青石蓝液染2-3分钟。
8、 水洗。
9、 Mayer氏苏木素染2-5分钟。
10、 水洗。
11、 1%盐酸酒精稍分化。
12、 流水冲洗至蓝化。
13、 橙黄G液复染10-20秒。
14、 水洗。
15、 常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:嗜碱细胞颗粒呈紫红色,嗜酸细胞颗粒橙黄色,嫌色细胞浅灰蓝色或无色,细细胞鲜橙黄色,胞核蓝褐色。

二、三色合染法( Dawexs和Hillier,1964)
试剂配制:
(1)马休黄液:马休黄(Martius  yellow)0.1g,无水酒精95ml,磷钨酸2g,蒸馏水5ml
(2)酸性品红液:酸性品红1g,蒸馏水98ml,冰醋酸2ml
(3)苯胺蓝液:苯胺蓝(aniline blue)0.5g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml(4)三色混合液:马休黄液3份,酸性品红液2份,苯胺蓝液3份。
使用前一天依次混合。
(5)天青石蓝液天青石蓝染液:天青石蓝(celestin  blus  B)0.5g,硫酸铁铵 5g,蒸馏水100ml,纯甘油14ml,麝香草酚50mg
用烧杯中盛蒸馏水,加入硫酸铁铵,不断摇动使其完全溶解,再加入天青石蓝,用玻棒搅匀,煮沸2-3分钟。在煮沸时应轻轻搅动,防止天青石蓝聚于瓶底成片块状。冷却后过滤并加入纯甘油和麝香草酚。
(6)Mayer氏苏木素液Mayer氏苏木素:苏木素0.1g,蒸馏水100ml,碘酸钠20mg,硫酸铝铵5g,柠檬酸100mg,水合氯醛5g
         苏木素在蒸馏水中使完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠和硫酸铝铵,用玻棒搅动使硫酸铝铵安全溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,过滤后即可使用。
操作方法:
1、 切片脱蜡至水。
2、 天青石蓝液染2-3分钟。
3、 水洗。
4、 Mayer氏苏木素液染2-3分钟。
5、 水洗。
6、 1%盐酸酒精分化。
7、 流水冲洗10分钟。
8、 三色混合液染8-12分钟。
9、 自来水速洗,滤纸吸干。
10、 无水酒精迅速脱水。
11、 二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:嗜酸性细胞颗粒呈红色,嗜碱性细胞颗粒蓝色,嫌色细胞浅灰蓝色或无色,红细胞黄色,胞核蓝褐色。

           胰岛细胞
一、硝酸银法( Grimelius,1968)
试剂配制:
(1)缓冲硝酸银液:1%硝酸银水溶液(新配)3ml,0.2M醋酸缓冲液(pH5.6)10ml,双蒸水87ml
(2)还原液:对苯二酚1g,亚硫酸钠5g,蒸馏水100ml
以上两液要临用前配制。
(3)5%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、 切片脱蜡至水,用蒸馏水再洗二次。
2、 切片放入预热的缓冲硝酸银液(60℃)3小时。
3、 用滤纸稍吸去周围银液,蒸馏水速洗。
4、 入还原液(45℃)处理1分钟。
5、 蒸馏水洗,显微镜下观察。
6、 5%硫代硫酸钠液处理1分钟。
7、 流水冲洗10分钟。
8、 95%酒精及无水酒精脱水。
9、 二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:胰岛α细胞胞质内颗粒呈棕黑色,β和δ细胞阴性。


二、、醛品红橙黄G法(改良Gomori,1950)
试剂配制:
(4) 酸化高锰酸钾水溶液:
甲液:0.5%高锰酸钾水溶液高锰酸钾0.5g,蒸馏水加至100ml
乙液:0.5%硫酸水溶液:纯硫酸0.5ml,蒸馏水99.5ml
甲、乙两液分瓶装,临用前等份混合。
(2)2%草酸水溶液:草酸2g,蒸馏水加至100ml
(3)醛品红染液:碱性品红0.5g,70%酒精95ml,浓盐酸1ml,三聚乙醛1ml
     将碱性品红溶解于70%酒精,然后加浓盐酸和三聚乙醛1ml,慢慢摇动使之均匀混合,24小时后可以使用。
操作方法:
1、 新鲜组织固定于Bouin氏液,流水冲洗一晚,然后按常规脱水包埋。
2、 常规脱蜡至水。
3、 酸化高锰酸钾液氧化5分钟。
4、 水洗。
5、 2%草酸液漂白2-3分钟。
6、 流水冲洗5分钟。
7、 70%酒精稍洗。
8、 醛品红液染15-30分钟。
9、 70%酒精稍洗,至无多余颜色脱下。
10、 水洗。
11、 橙黄G液复染约1秒钟。
12、 水洗后常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:β细胞胞质内颗粒呈紫红至深紫色,背景为淡黄色。


            肾上腺嗜铬细胞
 甲苯胺蓝法(Wiesel)

试剂配制:
(1)Regaud氏固定液:3%重铬酸钾80ml,浓甲醛液20ml
临用前把两液混合,混合24小时后开始失效。
(2)1%甲苯胺蓝液:甲苯胺蓝1g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、新鲜组织立即置入Regaud氏液固定2-3天,每天换一次新液,再用3%重铬酸钾水溶液固定一天。
2、流水冲洗24小时,然后按常规脱水包埋。
3、切片脱蜡至水,再用蒸馏水洗。
4、用1%甲苯胺蓝液染20分钟。
5、水洗。
6、用95%酒精急速分化(约1-2秒钟)。
7、无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:嗜铬细胞质呈绿黄色,胞核蓝色。

             类癌
一、嗜银反应(Grimelius,1968)

试剂配制:
(1)缓冲硝酸银液:1%硝酸银水溶液3ml,0.2M醋酸缓冲液(pH5.6)10ml,蒸馏水87ml
(2)还原液:对苯二酚1g,亚硫酸钠5g,蒸馏水100ml
以上两液均需临用前配制
(3)5%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、切片脱蜡至水,蒸馏水洗。
2、放入预热的缓冲硝酸银液(60℃)3小时。
3、用滤纸稍吸去周围银液,蒸馏水速洗。
4、入还原液内(45℃)处理1分钟。
5、蒸馏水洗,显微镜下观察。
6、5%硫代硫酸钠液处理1分钟。
7、流水冲洗10分钟。
8、95%酒精及无水酒精脱水。
9、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:嗜银颗粒呈棕黑色。
注意事项:
1、组织必须新鲜。
2、适合甲醛或含甲醛的固定组织,不能用含酒精的固定液,因酒精可溶解嗜银颗粒。

二、亲银反应(Masson-Fontana,1928)
试剂配制:
(1)银氨液:取10%硝酸银水溶液20ml,逐滴加入氢氧化铵至产生沉淀后,继续滴加氢氧化铵使生成的沉淀溶解,溶液变清,再滴

入10%硝酸银数滴至溶液轻微混浊,然后加入蒸馏水20 ml,过滤后使用。
(2)1%氯化金水溶液:氯化金1g,蒸馏水加至100ml
先配制成1%氯化金液,用棕色小口砂塞瓶储存,再取1%氯化金液1份加蒸馏水4份配成0.2%氯化金液使用。
(3)5%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
(4)核固红液: 核固红 0.1g,硫酸铝 5g,蒸馏水  97ml
操作方法:
1、切片脱蜡至水,蒸馏水洗。
2、把切片放入银氨液内于暗处室温下作用24-48小时。
3、蒸馏水洗。
4、0.2%氯化金水溶液调色1分钟。
5、蒸馏水洗。
6、5%硫代硫酸钠液处理1-2分钟。
7、流水冲洗5分钟。
8、核固红液复染胞核5-10分钟。
9、自来水速洗。
10、95%酒精、无水酒精脱水、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:亲银颗粒呈黑棕色,黑色素也呈黑色,胞核红色。
注意事项:
1、组织必须新鲜并及时固定。
2、必须用甲醛或含甲醛的固定液固定标本。


             肥大细胞
一、甲苯胺蓝法

试剂配制:
(1)0.5%甲苯胺蓝液:甲苯胺蓝0.5g,蒸馏水加至100ml
(2)0.5%冰醋酸液:冰醋酸0.5ml,蒸馏水99.5ml
操作方法:
1、用10%甲醛生理盐水溶液固定,按常规脱水包埋。切片脱蜡至水。
2、0.5%甲苯胺蓝液染20-30分钟。
3、水洗。
4、0.5%冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰(在显微镜下控制)。
5、水洗,用风扇吹干或温箱烘干。
6、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:肥大细胞颗粒呈红紫色,胞核蓝色。


二、醛品红-橙黄G法(改良的Gomori,1950)
试剂配制:
(1)醛品红染液:碱性品红0.5g,70%酒精95ml,浓盐酸1ml,三聚乙醛1ml
     将碱性品红溶解于70%酒精,然后加浓盐酸和三聚乙醛1ml,慢慢摇动  使之均匀混合,24小时后可以使用。
(2) 橙黄G液:橙黄G(orange  G)2g,蒸馏水100ml,磷钨酸5g
 把橙黄G溶于蒸馏水,再加入磷钨酸,稍摇动使其溶解,静置一夜后,吸取上面的澄清液使用。
操作方法:
1、用10%甲醛生理盐水溶液固定,按常规脱水包埋。
2、切片脱蜡至酒精。
3、70%酒精稍洗。
4、入醛品红液染10-15分钟。
5、70%酒精分化并洗去多余染液。
6、水洗。
7、橙黄G液滴染约1秒钟。
8、水洗。
9、各级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:肥大细胞颗粒呈紫红至深紫色,弹力纤维也呈深紫色,红细胞鲜橙黄色,其余组织为淡黄色。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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