碱性磷酸酶
钙钴法（改良的Gomori法，1952）
试剂配制：
（1）碱性磷酸酶孵育液：2%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerophos-phate）2.5ml ，2%巴比妥钠2.5ml ，2%氯化钙4.5ml，2%硫酸镁0.2ml蒸馏水0.3ml依次混合后，pH值应为9.2-9.4。
（2）2%硝酸钴水溶液：硝酸钴（codalt nitrate）2g，蒸馏水加至100ml
（3）1%硫化铵水溶液：硫化铵1ml，蒸馏水99ml
操作方法：
A、冰冻切片法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm，贴于玻片，风扇吹干后有冷丙酮固定10分钟。或组织用105甲醛钙于4℃冰箱固定12-18小时，冰冻切片，蒸馏水洗后贴于玻片上，风扇吹干。
2、入碱性磷酸酶孵育液（预热37℃）于37℃怛温箱孵育。
3、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
4、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
5、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
6、15硫化铵水溶液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
8、阿拉伯糖胶封盖或常规脱水透明，中性树胶封固。
B、石蜡切片法：
1、新鲜组织取材2mm厚，用冷丙酮于4℃冰箱固定12-18小时。更换冷丙酮2次，每次约30-60分钟。
2、二甲苯透明2次（室温）。每次约30分钟。
3、浸蜡2-3次，每次约20-30分钟。（温度不要高于60℃）。
4、石蜡包埋。如不立即切片，蜡块放于4℃冰箱保存。
5、石蜡切片厚4-6μm，在37℃温水贴片。
6、在45℃温箱烧片1-2小时。
7、切片常规脱蜡至水。
8、入孵育液（预热至37℃）于37℃恒温箱孵育半至3小时或更长时间。
9、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
10、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
11、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
12、1%硫化铵水溶液处理1分钟。
13、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
14、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：碱性磷酸酶活性处呈棕黑色沉淀。
对照方法：
1、另配一孵育液，其中省去β-甘油磷酸钠，改用等量的蒸馏水代替。
2、把切片先置入80-90℃的热水中处理10分钟，然后按上述孵育方法进行操作。
3、切片用Lugol氏碘液处理3分钟，5%硫代硫酸钠液处理1分钟，充分水洗后入孵育液。
经上述方法之一处理过的对照片应为阴性。

　　　　　　　　　酸性磷酸酶
硝酸铅法（根据Gomori法）
试剂配制：
（1）酸性磷酸酶孵育液：巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0）10ml，硝酸铅（lead nitrare）12mg，3%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerop-hosp hate）1ml，先把硝酸铅溶于巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0），然后加入β-甘油磷酸钠，混合后过滤，调pH值至pH5.0
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷片厚6μm，冷丙酮固定10分钟。
2、把切片置入酸性磷酸酶孵育液（预热至37℃），37℃孵育0.5- 2小时。
3、蒸馏水洗3次，每次1分钟。
4、1%冰醋酸液略洗。
5、蒸馏水浸洗2次。
6、1%硫化铵液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
8、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：酸性磷酸酶活性处呈棕黄至棕褐色。

 　　　　　　　　  三磷酸腺苷酶
钙激活法（1973）
试剂配制：
（1）碱性前孵育液（pH10.0）： 0.1M巴比妥钠2ml，0.18M氯化钙2ml，蒸馏6ml
（2）酸性前孵育液：0.2M醋酸盐缓冲液（pH4.6）10ml
（3）底物孵育液（pH9.4）：0.1M巴比妥钠2ml，0.18M氯化钙1ml，蒸馏水7ml，三磷酸腺苷二钠盐（adenosine-5′-triphosphate，disodium）25mg，调pH至9.4。
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚6μm，分别贴于2张玻片上，风扇吹干。
2、取一张切片，于碱性前孵育液（pH10.0）室温孵育15分钟。
3、取另一张切片，入酸性前孵育液（pH4.6）室温孵育5分钟，然后再入碱性前孵育液（pH10.0）洗30秒钟。
4、将上述二张切睛入底物孵育液（pH9.4）于室温孵育30-45分钟。
5、1%氯化钙液浸洗3次，每次约3分钟。
6、2%氯化钴液处理3分钟。
7、于0.01M巴比妥钠液充分洗4-5次。
8、流水冲洗1分钟，蒸馏水洗。
9、1%硫化铵液处理1分钟。
10、充分水洗。
11、常规脱水透明，中性树胶封固。