碱性磷酸酶
钙钴法（改良的Gomori法，1952）
试剂配制：
（1）碱性磷酸酶孵育液：2%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerophos-phate）2.5ml ，2%巴比妥钠2.5ml ，2%氯化钙4.5ml，2%硫酸镁0.2ml蒸馏水0.3ml依次混合后，pH值应为9.2-9.4。
（2）2%硝酸钴水溶液：硝酸钴（codalt nitrate）2g，蒸馏水加至100ml
（3）1%硫化铵水溶液：硫化铵1ml，蒸馏水99ml
操作方法：
A、冰冻切片法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm，贴于玻片，风扇吹干后有冷丙酮固定10分钟。或组织用105甲醛钙于4℃冰箱固定12-18小时，冰冻切片，蒸馏水洗后贴于玻片上，风扇吹干。
2、入碱性磷酸酶孵育液（预热37℃）于37℃怛温箱孵育。
3、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
4、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
5、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
6、15硫化铵水溶液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
8、阿拉伯糖胶封盖或常规脱水透明，中性树胶封固。
B、石蜡切片法：
1、新鲜组织取材2mm厚，用冷丙酮于4℃冰箱固定12-18小时。更换冷丙酮2次，每次约30-60分钟。
2、二甲苯透明2次（室温）。每次约30分钟。
3、浸蜡2-3次，每次约20-30分钟。（温度不要高于60℃）。
4、石蜡包埋。如不立即切片，蜡块放于4℃冰箱保存。
5、石蜡切片厚4-6μm，在37℃温水贴片。
6、在45℃温箱烧片1-2小时。
7、切片常规脱蜡至水。
8、入孵育液（预热至37℃）于37℃恒温箱孵育半至3小时或更长时间。
9、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
10、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
11、蒸馏水洗2-3次，每次1分钟。
12、1%硫化铵水溶液处理1分钟。
13、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
14、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：碱性磷酸酶活性处呈棕黑色沉淀。
对照方法：
1、另配一孵育液，其中省去β-甘油磷酸钠，改用等量的蒸馏水代替。
2、把切片先置入80-90℃的热水中处理10分钟，然后按上述孵育方法进行操作。
3、切片用Lugol氏碘液处理3分钟，5%硫代硫酸钠液处理1分钟，充分水洗后入孵育液。
经上述方法之一处理过的对照片应为阴性。

　　　　　　　　　酸性磷酸酶
硝酸铅法（根据Gomori法）
试剂配制：
（1）酸性磷酸酶孵育液：巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0）10ml，硝酸铅（lead nitrare）12mg，3%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerop-hosp hate）1ml，先把硝酸铅溶于巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0），然后加入β-甘油磷酸钠，混合后过滤，调pH值至pH5.0
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷片厚6μm，冷丙酮固定10分钟。
2、把切片置入酸性磷酸酶孵育液（预热至37℃），37℃孵育0.5- 2小时。
3、蒸馏水洗3次，每次1分钟。
4、1%冰醋酸液略洗。
5、蒸馏水浸洗2次。
6、1%硫化铵液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
8、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：酸性磷酸酶活性处呈棕黄至棕褐色。

 　　　　　　　　  三磷酸腺苷酶
钙激活法（1973）
试剂配制：
（1）碱性前孵育液（pH10.0）： 0.1M巴比妥钠2ml，0.18M氯化钙2ml，蒸馏6ml
（2）酸性前孵育液：0.2M醋酸盐缓冲液（pH4.6）10ml
（3）底物孵育液（pH9.4）：0.1M巴比妥钠2ml，0.18M氯化钙1ml，蒸馏水7ml，三磷酸腺苷二钠盐（adenosine-5′-triphosphate，disodium）25mg，调pH至9.4。
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚6μm，分别贴于2张玻片上，风扇吹干。
2、取一张切片，于碱性前孵育液（pH10.0）室温孵育15分钟。
3、取另一张切片，入酸性前孵育液（pH4.6）室温孵育5分钟，然后再入碱性前孵育液（pH10.0）洗30秒钟。
4、将上述二张切睛入底物孵育液（pH9.4）于室温孵育30-45分钟。
5、1%氯化钙液浸洗3次，每次约3分钟。
6、2%氯化钻液处理3分钟。
7、于0.01M巴比妥钠液充分洗4-5次。
8、流水冲洗1分钟，蒸馏水洗。
9、1%硫化铵液处理1分钟。
10、充分水洗。
11、常规脱水透明，中性树胶封固。

　　　　　　　　　葡萄糖-6-磷酸酶
硝酸铅法（Wachstein and Meisel，1956）
试剂配制：
（1）0.1M三羟甲基氨基甲烷/失水苹果酸缓冲液（pH6.7）
（2）0.125%6-磷酸葡萄糖液：6-磷酸葡萄糖二钠盐（glucose-6-phosphate，disodium sait）5mg，蒸馏水加至4ml
（3）2%硝酸铅液：硝酸铅（lead nitrate）2g，蒸馏水加至100ml
（4）孵育液：0.125%6-磷酸葡萄糖液4ml，0.1M三羟四基氨基甲烷/失水苹果酸缓冲液（pH6.7）4ml，2%硝酸铅液0.6ml，蒸馏水1.4ml，依次混合后过滤。
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚6μm，贴于玻片，风扇吹干。
2、入预温的孵育液内于37℃孵育10-20分钟。
3、蒸馏水洗2次，每次1分钟。
4、1%硫化铵处理1分钟。
5、流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗。
6、10%中性甲醛液固定10分钟。
7、流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗。
8、阿拉伯糖胶或甘油明胶封盖。
结果：葡萄糖-6-磷酸酶活性部位呈黄棕色至棕黑色颗粒状沉淀。

　　　　　　　　　非特异性酯酶
乙酸-α-萘酯-固蓝B盐法（Gomori，1952）
试剂配制：
（1）0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）
（2）酯酶孵育液：乙酸-α-萘酯（α-maphthyl acetate）5mg，丙酮0.2ml，0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）10ml， 固蓝B盐（fast dlue B salt）10mg，先将乙酸-α-萘酯溶于丙酮，加入0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）10ml，反复搅拌，直到生成的混浊物大部分消失为止。最后加入固蓝B盐10mg，溶解后过滤。此液应临用前配制。
（3）核固红液: 核固红 0.1g，硫酸铝 5g，蒸馏水  97ml
操作方法：
1、新鲜组织低温恒次序切片厚6μm，贴于玻片，风扇吹干。
2、入孵育液于室温（20-25℃）孵育5-15分钟。
3、流水冲洗1分钟。
4、核固红液复染5-10分钟，水洗。
5、阿拉伯糖胶或甘油明胶封盖。
结果：非特异性酯酶活性所在部位呈紫黑色，胞核红色。

　　　　　　　　　　脂   酶
温波士顿法（Gomori，1950）
试剂配制：
（1）0.05M三羧甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液（Ph7.2）
（2）5%吐温水溶液：吐温（tween40、60、80均可）0.5g ，0.05M三羧甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液（pH7.2）加至10ml
（3）10%氯化钙液：氯化钙10g，蒸馏水加至100ml
（4）2%硝酸铅液：硝酸铅2g，蒸馏水加至100ml
（5）孵育液：0.05M三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液（pH7,2）90ml ， 5%吐温液4ml，10%氯化钙液4ml
（6）核固红液: 核固红 0.1g，硫酸铝 5g，蒸馏水  97ml
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm，贴于玻片，蒸馏水洗。风扇吹干后于冷10%甲醛钙液固定10分钟，蒸馏水洗。
2、入预温的孵育液于37℃孵育3-12小时。
3、蒸馏水洗3次，每次1分钟。
4、2%硝酸铅液处理10分钟。
5、蒸馏水洗2次，每次2分钟。
6、1%硫化铵液处理2分钟。
7、流水冲洗5分钟。
8、核固红液复染胞核5-10分钟。
9、水洗。
10、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：脂酶活性部位呈棕至棕黑色。

　
　　　　　　　　　胆碱酯酶
亚铁氰化铜法（根Karnovsky和Roots，1964）
试剂配制：
（1）0.1M醋酸盐缓冲液（pH5.5）
（2）0.1M柠檬酸钠液：柠檬酸钠194mg，蒸馏水加至10ml
（3）30mM硫酸铜液：硫酸铜75mg，蒸馏水加至10ml
（4）5mM铁氰化钾液：铁氰化钾16.5mg，蒸馏水加至10ml，放于冰箱保存，仅可使用数天。
（5）孵育液：碘化乙酰硫代胆碱（acetylthiocholine iodide）5mg，蒸馏水1ml，0.1M醋酸盐缓冲液（PH5.5）6.5ml，0.1M柠蒙酸钠液0.5ml，30m硫酸铜液1ml，5mM 铁氰化钾液1 ml。先把碘化乙酰硫代胆溶于蒸馏水，再加入醋酸盐缓冲液，等完全溶解后，依次加入其余各试剂，每加入一种试剂必须用玻棒搅拌。
操作方法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm，贴于玻片，蒸馏水洗。风扇吹干后于冷10%甲醛钙液固定，蒸馏水洗。
2、把切片置入预温的孵育液于37℃孵育1-2小时，至切片呈淡棕色即可取出于镜下观察，如阳性产物颜色仍较淡，可用蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。
3、取出流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗。
4、阿拉伯糖胶或甘油明胶封盖。
结果：乙酰胆碱酯酶活性部位呈红棕色至深棕色。

 　　　　　　　　  γ-谷氨酰转肽酶
萘酰胺法（Lojda，1975）
试剂配制：
（1）底物溶液：γ-L-谷氨酰-α萘酰胺（γ-L-glutamyl-αnaphthylamide）12mg，二甲基甲酰胺（dimethyl formamide）0.15ml，1N氢氧化钠溶液0.15ml，蒸馏水4.7ml，依次加入，充分溶解混合，于4℃冰箱可可存一周。
（2）4%对品红盐酸液：对品红（pararosanilin）1g，2N盐酸25ml，充分溶解后于第二天过滤，置于冰箱保存备用。
（3）4%亚硝酸钠液：亚硝酸钠10mg，蒸馏水加至0.25ml，临用前配制
（4）缓冲六偶氮对品红液：4%对品红盐酸液0.25ml，4%亚硝酸钠液0.25ml，0.1M醋酸缓冲液（pH6.5）8.5ml。取烧杯一只，先加入对品红盐酸液，然后慢慢滴入亚硝酸钠液，边滴边充分摇匀，混合后放置2分钟，使充分偶氮化，最后加入0.1M醋酸缓冲液（pH6.5），混合后用1N氢氧化钠液调至pH6.5。
（5）孵育液：底物溶液1ml，缓冲六偶氮对品红液9ml，甘胺酰替甘氨酸（glycylglycine）5mg
（6）2%硫酸铜液：硫酸铜2g，蒸馏水加至100ml
操作方法：
低温恒片切片法：
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm，贴于玻片。风扇吹干后入冷丙酮固定10分钟。
2、入孵育液于室温（20-25℃）作用15-45分钟。
3、蒸馏水洗。
4、2%硫酸铜液处理5分钟。
5、蒸馏水洗。
6、4%甲醛液固定1小时。
7、流水水洗。
8、苏木素浅染核。
9、流水冲洗。
10、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：酶活性处呈棕至棕黄色。
石蜡切片法：
1、新鲜组织立即取材厚约2mm，放入冷的95%酒杯精丙酮（1:1）液于4-8℃冰箱内固定12-24小时。
 2、用纯丙酮于冰箱内脱水2次，每次约15分钟。
3、二甲苯透明（室温）2次，每次15分钟。
4、浸蜡（用48-52℃石蜡，温度不高于56℃）2次，每次约30分钟。
5、石蜡包埋（用56-58℃石蜡，温度不高于60℃）。蜡块如不立即切片，应置于4℃冰箱保存。
6、烤片（约45℃片干燥箱内）1-2小时，取出后即可进行脱蜡及孵育染色，未经脱蜡的切片可于冰箱内保存了数天以上。
7、常规脱蜡后入不孵育液（室温20-25℃）作用15-45分钟。
8、蒸馏水洗。
9、2%硫酸铜液处理5分钟。
10、蒸馏水洗。
11、4%甲醛液固定1小时。
12、流水水洗。
13、苏木素浅染核。
14、流水冲洗。
15、常规脱水透明，中性树胶封固。  
 结果：酶活性处呈棕黄色，定位比低温恒冷切片法更清楚。