(1)组织切片常规脱蜡入水。 (2)胰酶或胃蛋白酶消化,37℃ 30分钟点。 (3)水洗。 (4)0.3%H2O2甲醇液:阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)20分钟。(冰冻切片、细胞涂片从此步骤开始) (5)水洗后经PBS洗2-3次。 (6)滴加正常血清37 ℃,20分钟。 (7)甩去血清,加酶标记抗体,37℃ 30分钟。置温盒内。 (8)PBS洗3次。 (9)显色。显微镜下观察控制呈色反应,以结果清晰,背景无非特异性染色为度。 (10)自来水充分冲洗。 (11)必要时苏木素复染胞核。 (12)封片。若用DAB呈色,需经酒精脱水,二甲苯透明,树胶封片。若用AEC等则不能用酒精脱水,用吸水纸去周围组织多余的水份,直接将水溶性封片剂封片。 |