其目的在于证明和肯定阳性结果的特异性，排除非特异性疑问。主要是针对第一抗体对照，常用的对照方法包括：①阳性对照；②阴性对照；③阻断试验；④替代对照；⑤空白对照；⑥吸收试验；⑦自身对照。
（一）阳性对照
用已知抗原阳性的切片作对照与待检标本同时进行免疫细胞化学染色，对照切片应呈阳性结果，称为阳性对照。
（二）阴性对照
用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果，称阴性对照，是阴性对照的一种，其实空白、替代、吸收和抑制试验都属阴性对照。
（三）自身对照
自身对照，仅仅能够说明实验过程是正确的，但不能证明一抗的稀释比是否正确，肿瘤组织是否有存在假阴性的可能。因为自身对照往往是正常组织，而正常组织抗原很强，极容易进行抗原抗体结合，在抗体浓度较低时，也能较好的表达。而肿瘤组织抗原相对较弱，如果抗体浓度较低，不表达或弱表达，容易产生假阴性。