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常用细胞固定剂及其性能

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:38288次
1、95%酒精:
    是最常用的细胞学固定液,能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,但核蛋沉淀后,能溶于水,因此,经95%酒精固定的涂片,染色前没有必要经过水洗。此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色。固定时间根据标本的不同,时间也不尽相同,一般标本固定时间为15-30分钟,痰标本需要更长一些时间。经过95%酒精固定的标本,细胞核保存较好,结构清晰,颜色鲜艳。如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳,可以保护细胞免受空气干燥后的人工假象。
2、乙醚酒精液(1:1):
    其效果与95%酒精相似,但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味,容易挥发,长期低浓度吸入,有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应。长期皮肤接触,可发生皮肤干燥、皲裂。所以现在已经逐渐被95%酒精所代替。
3、甲醇:
    固定时间快,细胞收缩小,细胞核保存较好,结构清晰,染色鲜艳。常作为穿刺细胞涂片的固定液。对抗原保存较好,可作为细胞涂片免疫组化的固定液。缺点是具有挥发性和毒性,大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害。甲醇的毒性与其代谢产物甲醛和甲酸的蓄积有关。以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不能合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩。近年研究表明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害,主要与甲酸含量相关。
4、冰醋酸:5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白,但能沉淀核蛋白。渗透性强,固定快,能使红细胞膨胀而破碎,常与其它液体配合使用。
4、无水酒精:
    对糖原保存较好,容易使细胞收缩,其性能与95%酒精相似,很少单独使用,一般只用于糖原的固定。
5、丙酮:
    为易挥发的无色液体,有刺激性气体。可使蛋白质沉淀,渗透性强,细胞收缩严重,对核的固定差。很少用于常规细胞学的固定。广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定,也有人用于抗原的保存,作为细胞涂片免疫组化的固定液。丙酮具有挥发性和毒性,大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害。
6、Carnoy 固定液
配方:无水乙醇60ml,氯仿30ml,冰醋酸10ml。
  Carnoy液能固定胞浆和胞核,尤其适宜于染色体等。常用于糖原及尼氏体的固定,由于冰醋酸能溶解红细胞并可防止细胞由酒精引起的过渡收缩,对固定有血的标本和显示DNA、RNA效果很好。缺点是每次固定后固定液内有大量的红细胞碎片和细胞脱落,必须及时过滤,否则容易造成污染。其次,氯仿具有挥发性和毒性,大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害。
7、10%中性缓冲甲醛液:
固定液配方1:40%甲醛10ml,0.01mol/L pH7.4的PBS90ml。
固定液配方2:40%甲醛120ml,蒸馏水880ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)4g,磷酸氢二钠(Na2HPO4)13g。
  10%中性缓冲甲醛液对大多数抗原保存较好,是免疫组织化学最常用的固定液,组织穿透性好,组织收缩较小。但此液体不适合固定湿固定的涂片,可作为干固定涂片和细胞蜡块的固定液。甲醛也具有挥发性和毒性。大量吸入会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛,也可发生支气管哮喘。经常吸入少量甲醛,能引起慢性中毒,出现粘膜充血、皮肤刺激症、过敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等。全身症状有头痛、乏力、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻以及植物神经紊乱等。



参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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